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血小板裂解物的制備方法有哪幾種?
發布時間:2021-11-02瀏覽:98次
血小板中含有很多不同的細胞生長因子,包括PDGF, VEGF,EGF等,存在血小板顆粒中的大量生長因子和細胞因子可以通過凝血酶激活和凝固自然釋放,也可以通過冷凍/解凍介導的血小板溶解、超聲或化學治療人工釋放。以不同的釋放策略制備的人血小板裂解物被視為可以替代胎牛血清(FBS)作為培養基補充劑的合適選擇,使人類細胞在無動物血清條件下高效增殖,在體細胞治療和組織工程中具有廣泛的應用前景。
 
血小板裂解物的制備方法有哪幾種?
 
誘導血小板釋放生長因子和其他生物活性分子的四大方法:
 
(1)多次冷凍/解凍循環(反復凍融法):
 
多次冷凍/解凍循環是常見的簡單有效和經濟的方式誘導血小板激活釋放因子。典型的情況是,濃縮的血小板在-80℃時被休克冷凍,37℃時解凍,從而使血小板激活和碎裂。
 
(2)直接激活法:
 
這種方法是加入鈣鹽溶液(通常是CaCl2),以激活內源性凝血酶,從而纖維蛋白形成和血小板脫顆粒。也有人或重組凝血酶的直接激活,但重組凝血酶的使用可能會使HPL用于細胞治療的監管和批準復雜化。
 
(3)聲波降解法:
 
多年來,超聲單獨或與冷凍/解凍循環相結合也被用作一種快速、高效和經濟高效的釋放血小板的方法。在20kHz頻率下超聲作用30分鐘可有效釋放血小板顆粒含量。
 
(4)溶劑/洗滌劑 (S/D)處理:
 
從制備工藝上來說,S/D處理法略微復雜。用1%磷酸三丁酯(TNBP)和1%的TritonX-100在30℃下處理新鮮冷凍血漿(FFP)4小時,制備S/D-FFP。添加的試劑用大豆油萃取和不溶性C18樹脂層析除去。用S/D-FFP免疫家兔,然后用未經處理的FFP吸附誘導的抗體,證實沒有新的免疫原的形成。這種方法還有一個好處就是可以滅活被脂質包裹的病毒。
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